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室间质评

血栓与止血检测的质量保证和标准化

发布时间:2019-06-28

血的标准化和质量控制,是指采用统计学原理,运用规范的物理、化学、生物学的方法,对血栓与止血实验的技术、操作、仪器、试剂和标本等项的质量水平,进行合理的管理、检测和评价,以标准化和质量控制来杜绝误差,提高实验的精密度、准确性和可靠性。

一、常用的血栓与止血检测项目

1.板计数、 血小板功能检测

2.TAPTTFbgTT

3.各种凝血因子、WWF

4.TPCPS

5.FDPD-D、 α2-PIPLG.  狼疮抗凝物

二、PT结果的报告方式

参考值为11-14s;待测者的结果超过正常对照3s以上有临床意义。

用病人PT/正常PT值来表达,其参考值为0.82-1.15

国际标准化比值(INR)=(patient PT/MNPT)ISI

ISI值要与使用的试剂和仪器相适应,换一个批号都要更换ISI值。

使用同一种ISI值的PT试剂,在不同仪器上检测,其正常均值各不相同,若用同一ISI值计算INR,得出的数值也存在不同程度的差异。因此建议建立LocalISI(因为每台仪器上使用的凝血活酶试剂都应有特定ISI)

三、MNPT的确定方法
标本:健康人血浆(至少20份以上)年龄:18-55
性别男、女(非妊娠、非经期)各半
药物的影响:激素、抗生素、口服避孕药、降压药、维生素

采血前要求:勿剧烈运动、空腹或只服少量无脂类食物

 

四、方法学之间的可比性

Clauss法一功能检测,操作简单,结果可靠,WHO推荐为Fib-C的参考方法(凝血酶为30~ 100U/ml, OVBpH值应在7.35) ;

PT演算法一更快速,简便,且重复性较好,当Fib在正常范围或轻度异常时,与Clauss法结果差异不大,但当Fib5.0gLFib 1.5g/L时,PT演算法结果不可信,一般高于Clauss;

⑧免疫法、比浊法和化学法操作繁琐,均非Fib功能检测法,故与生理性Fib活性不一定总是成平行关系。

 

五、不同结果的表达方式(DDUFEU

DDU反映的是小分子片段(195KDa)D-二聚体的量,其校准物是纯化的D-二聚体;

FEU反映的是大分子片段(340KDa)D-二聚体的量,其校准物是标化的纤维蛋白原水解生成的交联纤维蛋白降解产物,故用降解前纤维蛋白原分子的量来表示。

FEU表达的D-二聚体的量相当于用DDU表达的1.7倍,但不建议进行形式

和量纲的转换。

 

六、参考区间和cutoff

参考区间:反映的是当地健康人群D-二聚体的水平

cutoff:只是用来排除DVTPE,而不是用于区别健康人群与非健康人群,cutoff值是采集疑似病人的样本建立的。且妊娠女性、65岁以上的老年人应重新建立参考区间和cutoff值。

如果实验室将D-二聚体用于DVT/PE的排除诊断,应该将cutoff和参考范围一样,与病人的D-二聚体结果一起报告给临床。如果D-二聚体不是用于DVT/PE排除诊断的,实验室应该告知临床。例如日系和国产的D-二聚体试剂,主要用于DIC的筛查。

 

七、分析前的质量控制

指从临床医生开出医嘱开始,按时间顺序的步骤, 包括:提出雷火苹果app要求、患者的准备、标本的采集、运送到实验室并在实验室内传递,至分析程序启动为止,期间的质量控制。

分析前因素所致误差占总误差的46-68%

1、 样本采集及存贮

1) 采血时间

采血与进餐:尽可能在7-9am采血,最好空腹。 除非是在进行时间依赖的药物检测,例如:肝素;

采血与诊治时间安排:采血尽量安排在其它诊疗之前,避免因其它诊疗造成结果的偏差;

生物周期影响:避免因生理周期造成的偏差,导致检测结果不能真实体现病人状况。

药物对凝血结果的影响:巴曲酶注射液具有降低纤维蛋白原的作用,用药后可能有出血或止血延缓现象。因此,治疗前及治疗期间应对患者进行血纤维蛋白原和血小板凝集情况的检查,并密切注意临床症状。首次用药后第一次血纤维蛋白原低于1.00g/L者,给药治疗期间出现出血或可疑出血时,应终止给药,并采取输血或其它措施。

2) 采血程序

采血原则:无论使用真空采血管或注射器进行静脉采血,均需要将采集的第二管血液用作凝血标本的检测;

止血带的使用:应尽量在使用止血带 1 min内采血,看见回血,立即解开止血带。>1 minFbg升高;>3minPTAPTTTT缩短。

采血部位:尽可能静脉采血,特定情况下可以通过内置管采血,在抽取凝血项目样本管之前,管路应使用5ml生理盐水冲洗,并将抽取的第一个5ml6倍管路体积(内置管死腔量)的血样丢弃。

3) 抗凝剂与采血量

抗凝剂的选择:用于凝血实验的抗凝剂应为3.2%的枸橼酸钠,不能使用其他抗凝剂;

抗凝剂比例:抗凝剂与血液的体积比例应为19

抗凝剂比例调整:红细胞压积直接影响血浆与抗凝剂的比例,Hct55%,建议调整抗凝剂用量。

采血量少:抗凝剂浓度增高即结果假性升高(样本量减少90%时,会影响APTT结果;样本量减少80%时,会影响PT结果)

采血过量:抗凝不足 易产生凝块(样本量不得超过总量的+10%

样本管混匀:血液进入试管后,轻轻的颠倒混匀34次,使静脉血与抗凝剂充分混匀禁止使用试管摇床或混匀次数用力过猛或次数过多,容易引起溶血和血小板激活。

4) 样本离心

乏血小板血浆(PPP: 1500G离心15分钟,用于大多数检测项目;

富血小板血浆(PRP: 120G离心10分钟, 用于血小板功能检测;

无血小板血浆 (PFP: 1500G离心15分钟, 提取上层血浆, 1500G再次离心15 分钟。用于LA检测。

5) 保存与运送

样本运输:应尽量缩短运输时间,避免血样日晒雨淋,冰冻。运 输中避免管盖脱落;

样本保存:凝血样本应在4小时内完成检测,如果不能在4小时内完成检测,必须快速分离血浆并冷冻保存在塑料容器中;

保存期限:血浆冷冻于-20℃,最多可保存2周,冷冻于-70 ℃ ,最多可保存6个月。冷冻血浆应在37 ℃水浴中迅速复溶,轻轻混匀后立即测定,不可反复冻融。

保存与运输应注意:凝血试验标本应冷藏运输。但是,在寒冷情况下,血小板激活,PF4释放,中和肝素。因此接受肝素治疗病人标本应立刻分离血浆运送;若血液采集于非硅化试管,标本必须在1h内分离血浆。贮存于玻璃试管的血浆,在冷藏条件下因VII会激活,使PT结果缩短。

2、试剂及耗材

1)试剂

试剂选择:根据试验的重复性和敏感性,按照试验要求选择最适合的试剂,提倡使用配套试剂;

有效期:超过有效期的试剂不能再使用;

试剂更换批号:出凝血雷火苹果app项目,更换新批号试剂时,如试剂敏感度差异明显,应重新验证生物参考区间;试剂敏感度接近时,可使用5份健康人标本进行结果比对,以确认参考区间的适用性。

2)试剂复溶

I级去离子水复溶:要求PH 6.0 -7.0,水中含氨会迅速破坏V因子,不含有防腐剂,抗菌剂,抗生素等添加剂;

孵育时间:需在试剂说明书规定的温度和时间下孵育,以保证试 剂充分溶解;

试剂稳定性:试剂复溶后稳定时间和存贮要求参考试剂说明书超过稳定期限的试剂不能使用。

3)耗材

反应杯:正确使用仪器配套的反应杯不用带粉手套添加反应杯;

清洗液:正确使用仪器配套的清洗液不宜使用自行配制清洗液用完后加盖保存,防止有效成分挥发。浓度过高:腐蚀样品针,许多针从表面看已被腐蚀发黑,针的实际内外径已经被改变,造成仪器结果的重复性下降。浓度过低:不能有效灭活凝血酶,针容易堵塞、半堵塞同样造成结果的不准确。

3、仪器及质控

1)仪器

仪器环境:温度:1530℃( 最适宜温度 23 ℃);湿度:30 85%;大气压: 70 106kPa。避免阳光直照,灰尘,强无线电波和通讯设备干扰;

仪器定期维护保养:日维护、周维护、月维护、定期的清洁。定期保养可以使仪器保持良好的状态,得到可靠的结果。并延长仪器的使用寿命;

仪器校准:包括光路校准,样本针、试剂针位置校准,检测项目定标。

2)室内质控

质控物选择:宜使用配套质控物,使用非配套质控物时评价其质量和适用性;

质控物浓度水平及频度:至少使用2个浓度水平(正常和异常水平)的质控物;频度根据雷火苹果app样品量定期实施,检测当天至少1次;

质控项目:认可的所有检测项目均应开展室内质量控制。